外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡，是細胞間信號傳輸?shù)妮d體。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，它們廣泛存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中，參與細胞間通訊。近年來，外泌體的研究熱度持續(xù)攀升，在2019年國家自然科學(xué)基金獲批項目中，外泌體研究相關(guān)項目的總數(shù)突破500個，立項的總金額突破2億元。由于外泌體的尺寸很小僅為30~200 nm，目前很少有技術(shù)能夠在單個外泌體水平同時提供物理表征和蛋白表型分析。單個外泌體表征分析是將免疫學(xué)與光學(xué)完·美結(jié)合的種新技術(shù)。該技術(shù)用免疫識別將定的外泌體進行捕獲分離，然后再對目標(biāo)外泌體的表面標(biāo)志物及內(nèi)容物（如攜帶的蛋白質(zhì)、RNA、DNA及細胞因子）進行定量分析，從而更加全面地反映外泌體的性。

    作為外泌體表征分析的倡·導(dǎo)者，美國NanoView Biosciences于2018年推出了全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)ExoView，該系統(tǒng)經(jīng)推出，便引起了外泌體域科研工作者的廣泛關(guān)注，僅兩年在已有100多個實驗室采用該技術(shù)，發(fā)表文獻近百篇，刊載在Cell, Cell Biology, Journal of Extracellular Vesicles等期刊。基于中國外泌體研究的快速發(fā)展，Quantum Design中國在北京建立了業(yè)的客戶服務(wù)中心，正式推出ExoView®外泌體全面表征試劑盒測試服務(wù)，只需要少量樣品即可次完成外泌體計數(shù)、粒徑、蛋白表達、蛋白共定位、亞群分布的分析。

    ExoView®外泌體全面表征試劑盒可對細胞培養(yǎng)上清、血漿、血清、尿液、腦脊液、唾液等生物樣本中的外泌體直接進行分析，僅需50 µl稀釋樣本。試劑盒的捕獲抗體為anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型 IgG 對照，也可自定義。此外，試劑盒的熒光抗體分為CD9（Blue）、CD81（Green）、 CD63（Red）。

ExoView®外泌體全面表征試劑盒的勢包括：

• 異性捕獲：芯片上可包被多達6 種捕獲抗體，異性捕獲含定蛋白標(biāo)記物的外泌體。

• 對陽性外泌體計數(shù)：芯片捕獲外泌體后，可通過單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術(shù)直接檢測樣品中外泌體的數(shù)量。

• 單個外泌體蛋白共定位分析：檢測每個外泌體的熒光信號并進行統(tǒng)計，可獲得熒光共定位信息，用于分析樣品中不同表型外泌體的比例。

• 無需純化：使用抗體捕獲模式，防止樣品中雜質(zhì)影響結(jié)果，可直接檢測血液、尿液和細胞培養(yǎng)液中的外泌體，未純化樣品的測量結(jié)果與純化后基本致。

• 粒徑分辨率高：高精度SP-IRIS技術(shù)，可檢測≥50 nm的外泌體，測量結(jié)果與電子顯微鏡檢測結(jié)果基本致，并統(tǒng)計生成外泌體的粒徑分布結(jié)果。

• 可檢測外泌體內(nèi)容物：試劑盒配套相應(yīng)的穿膜劑，可穿透外泌體并對外泌體內(nèi)容物進行染色并檢測，如下圖所示，Non-permeabilized時只能檢測到跨膜蛋白CD9的熒光信號， Permeabilized后即可檢測到外泌體內(nèi)容物（如PD-L1、P-tau等）的表達。

檢測流程：

試劑盒檢測結(jié)果示例：

• 不同外泌體亞群數(shù)量統(tǒng)計

• 外泌體粒徑檢測

• 熒光共定位分析

• 單個外泌體成像圖

部分文獻：

[1]. Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[2]. WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. 2021

[3]. Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. 2021

[4]. Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. 2021

[5]. Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell. 2019

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1、全自動外泌體熒光檢測分析系統(tǒng)

https://www.chem17.com/product/detail/35508627.html